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一、眼鼻咽拭子采样方法

1.眼/鼻腔拭子:将拭子头在宠物眼角和结膜下轻轻擦拭3-5次采集;有眼泪时可采集适量的眼泪作为样本,使用同一根,同时用拭子头在宠物鼻腔处轻轻擦拭3-5次采集将拭子头折断于一次性使用病毒采样管中。

2.口腔/咽部拭子:新取一根拭子,将拭子头伸入宠物咽后壁及扁桃体隐窝、侧壁等处拭抹3-5次采集,或在口腔创面拭抹3-5次采集,收集粘膜细胞将拭子头折断于同一支一次性使用病毒采样管,充分震荡混匀待用。


二、粪便/肛拭子采样方法

1.肛拭子将拭子头用生理盐水润湿,然后插入肛门约1-2cm,轻轻转动拭子,采集结直肠表面粘液或黄便后取出将拭子头折断于一次性使用病毒采样管中

2.便拭子:使用拭子1/2拭子头采集豌豆大小新鲜粪便,将拭子头折断于同一支一次性使用病毒采样管,充分震荡混匀待用。



三、胸水/腹水、淋巴结穿刺液、脑脊液、尿液等采样方法

1.胸水/腹水200μL胸水/腹水直接提取核酸。

2.淋巴穿刺组织液、脑脊液直接取200μL液体进行核酸提取;若不足200μL,至少取50μL以上,直接进行核酸提取。

3.尿液200μL尿液直接提取核酸。

四、EDTA抗凝血

200μLEDTA抗凝血,直接提取核酸。(不可用肝素抗凝管采集抗凝血)

五、注意事项

1、眼睛鼻子共用一根棉签,先采眼睛后采鼻子,口腔单独用一根棉签,不得用病毒保存管中液体润湿后接触宠物的眼口鼻。

2、猫口炎六项和人宠共患十一项要求采EDTA血和眼口鼻的混合样本,取EDTA血100μL和含有眼口鼻采样棉签的病毒保存液100μL,分别加入到核酸提取管中的加样品处。

3、加200μL样本前,应混匀样本。核酸提取试剂使用前应向下甩动,使液体全部置于管底。

4、提取试剂放入仪器提取仓时,不得放反方向,有标签的朝外即朝向操作者。

6、核酸提取完成后,将磁棒套取下置于生物安全垃圾袋中,打开提取仓紫外线消毒15-30分钟。已取走核酸后的提取管应进行封口,防治污染环境。

7、PCR检测试剂使用前应向下甩动,使液体置于管底,然后用移液枪吸足10μL核酸提取产物加入到PCR检测试剂中,每只管中均加入,加入后盖好,应确认管内无气泡,向下甩动,使液体全部沉于管底。

8、扩增上机前,确保PCR试剂管盖盖紧,防止实验过程中蒸发和气溶胶污染,摆放时有数字面朝向操作者,不得放反方向,扩增完成后禁止打开,丢弃于生物安全垃圾袋中。

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